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掃描電鏡檢測(cè)分析的流程

掃描電鏡是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段，利用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng)從而微觀成像，其成像富有立體感，利用掃描電鏡我們可直接觀察各種樣品表面的細(xì)微結(jié)構(gòu)。掃描電鏡在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，主要應(yīng)用于細(xì)胞或組織樣本表面超微結(jié)構(gòu)的觀察分析，例如細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，氣管，腸道，皮膚、納米藥物、生物醫(yī)學(xué)材料、細(xì)菌、真菌等。

掃描電鏡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程：

1. 樣品的初步處理

a. 取材樣品面積可達(dá)8mm×8mm，厚度可達(dá)5mm。對(duì)于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀察的組織表面。

b. 樣品的清洗

(1)用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗;

(2)用5%的蘇打水清洗;

(3)用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。

c. 固定：固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同，常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大，固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長。也可用快速冷凍固定。

d. 脫水：樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水，然后進(jìn)入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。

2. 樣品的干燥

a. 空氣干燥法

空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將經(jīng)過脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行和節(jié)省時(shí)間;它的主要缺點(diǎn)是在干燥過程中，組織會(huì)由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較為堅(jiān)硬的樣品。

b. 冷凍干燥法

(1)置于冷凍保護(hù)劑中：將樣品置于冷凍保護(hù)劑中浸泡數(shù)小時(shí)。常用的冷凍保護(hù)劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%-40%甘油水溶液。

(2)驟冷：將經(jīng)過保護(hù)劑處理的樣品迅速投入用液氮預(yù)冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結(jié)。

(3)干燥：將已凍結(jié)的樣品移到冷凍干燥器內(nèi)已預(yù)冷的樣品臺(tái)上，抽真空，經(jīng)幾小時(shí)或數(shù)天后，樣品即達(dá)到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機(jī)溶劑對(duì)樣品成分的抽提作用，不會(huì)使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由于花費(fèi)時(shí)間長，消耗液氮多，容易產(chǎn)生冰晶損傷，因此未被廣泛應(yīng)用。

3. 樣品的導(dǎo)電處理(真空鍍膜法)

真空鍍膜法是利用真空膜儀進(jìn)行的。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍的金屬加熱，當(dāng)加熱到熔點(diǎn)以上時(shí)，會(huì)蒸發(fā)成極細(xì)小的顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導(dǎo)電。噴鍍用的金屬材料應(yīng)選擇熔點(diǎn)低、化學(xué)性能穩(wěn)定、在高溫下和鎢不起作用以及有高的二次電子產(chǎn)生率、膜本身沒有結(jié)構(gòu)。現(xiàn)在一般選用金或金和碳。為了獲得細(xì)的顆粒，有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金的。金屬膜的厚度一般為10 nm～20 nm。真空鍍膜法所形成的膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較復(fù)雜并且費(fèi)時(shí)，目前已經(jīng)較少使用。

4. 拍攝。

掃描電鏡檢測(cè)服務(wù)說明及結(jié)果：

1. 客戶提供：

8-10 mm3 左右的組織塊，取材部位要求盡量精準(zhǔn)。

如為細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)需≥10^6。

2. 公司提供：基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析。

3. 實(shí)驗(yàn)周期：25-30個(gè)工作日。